用二氯甲烷抽提血清TG，同時(shí)加入硅酸去除磷脂、游離甘油、甘油一酯、部分甘油二酯及蛋白。TG經(jīng)氫氧化鉀皂化生成甘油，酸化后以過(guò)碘酸氧化甘油產(chǎn)生甲醛，用亞砷酸還原過(guò)剩的過(guò)碘酸后，甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱產(chǎn)生紫紅色反應(yīng)，進(jìn)行比色測(cè)定。本法根據(jù)Van Handel等( 1957) 及Carlson法( 1963)改進(jìn)而來(lái)。
1.抽提試劑
( 1)二氯甲烷( HPLC級(jí))。
( 2)生理鹽水。
( 3)硅酸:用去離子水洗3次，去除細(xì)顆粒，然后用甲醇洗2次，用布氏漏斗( Whatman #42濾紙)過(guò)濾，空氣干燥。用前置65℃干燥箱烘干至少72小時(shí)，干燥器內(nèi)貯存。
2.皂化試劑 ( 1) 0.25% KOH乙醇液:
制備5% KOH水溶液100ml，取5ml用無(wú)水乙醇稀釋至100ml，臨用當(dāng)天配制，用超聲波去氣泡。
( 2) 0.1mol/L H2SO4:
濃H2SO46.0ml用蒸餾水稀釋至1L。
3.氧化、還原、顯色試劑過(guò)碘酸鈉( NaIO4) :
將1.34g NaIO4溶于1L蒸餾水中。
( 2)亞砷酸鈉( As2O3) :
將11.25g NaOH溶于約100ml蒸餾水中，未冷卻前加入25g As2O3，最后用蒸餾水稀釋成250ml。
( 3)變色酸顯色劑
1) 4mol/L H2SO4:將濃H2SO4444ml慢慢地加入至1500ml蒸餾水中，在冰水浴中配制，待完全冷卻后，加水至終體積2L。
2)顯色劑: 400ml蒸餾水中，加入5g變色酸，加入4mol/L H2SO4至2L。
4.標(biāo)準(zhǔn)液
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為三油酸酯及三軟脂酸酯。
( 1)貯存液(含2mg/L)
1)稱三油酸酯200mg，溶于二氯甲烷至100ml。
2)稱三軟脂酸酯100mg，溶于二氯甲烷至50ml。
將上述兩液按2∶1的比例充分混合，此液含TG 2.327mmol/L。
( 2)工作液:
由貯存液稀釋至所需濃度。
( 3)劑量響應(yīng)曲線:
工作液( S1～S5)各10ml，分別加入硅酸2g、生理鹽水0.5ml后，與標(biāo)本同樣處理，繪制劑量響應(yīng)曲線。線性范圍超過(guò)3.723mmol/L則不可靠。任何標(biāo)本值高于此水平時(shí)，應(yīng)稀釋后重新操作。
( 4)穩(wěn)定性:
標(biāo)準(zhǔn)貯存液與工作液應(yīng)放置4℃冰箱中，用帶塞的容器，以特氟隆( Teflon)條密封，每次取用后應(yīng)立即加蓋，并及時(shí)放進(jìn)冰箱，可穩(wěn)定6個(gè)月。超過(guò)6個(gè)月，因溶劑揮發(fā)可導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)值增高。
