菌種的制備是指將保存的菌種進行活化，再經搖瓶或種子罐等逐級擴大的過程。種子擴大培養(yǎng)增加菌體的數(shù)量，滿足工業(yè)化生產對大量菌種的需求。菌體達到一定濃度不僅是高效率和高質量生產的保證，而且是縮短發(fā)酵周期、降低生產成本的必然要求。種子擴大培養(yǎng)可以提升種子生產性能。首先，通過營養(yǎng)物質的充分供應和適宜環(huán)境的控制，可激發(fā)菌體的新陳代謝活力，讓菌體生長代謝旺盛；其次，在擴大培養(yǎng)過程中通過調節(jié)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度、pH等因素逐步向生產階段的真實環(huán)境逼近，調理菌體的代謝，讓菌體在快速增殖的同時使菌體的各項生理性能向最適宜生產需要的方向趨近。菌種經過擴大培養(yǎng)后，以優(yōu)勢菌進行生產，可以減小雜菌污染概率，減少“倒罐”現(xiàn)象，這是成功生產的保障。

菌種是從事微生物學及生命科學研究的基本資料，因此，菌種保藏是一項重要的基礎性工作。菌種保藏主要是根據微生物的生理生化特點，人工創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。

需要的器材與試劑

1.器材

恒溫培養(yǎng)箱，恒溫搖床，250mL錐形瓶，無菌移液器，接種環(huán)，無菌甘油，無菌離心管（5mL）等。

2.試劑

菌種：酵母（Candida sp.）。

培養(yǎng)基：葡萄糖20.0g/L，酵母膏6.0g/L，磷酸二氫鉀5.0g/L，硫酸鎂0.25g/L，pH 5；固體培養(yǎng)基另加瓊脂20g/L。

菌種的培養(yǎng)和保藏

1.菌種的活化

將冰箱保藏的斜面菌種用接種環(huán)轉接入新鮮的斜面培養(yǎng)基后，28℃恒溫培養(yǎng)48h。如果冰箱保藏菌種活力較低，可以重復上述操作進行多次傳代培養(yǎng)，以恢復菌種的活力。

2.菌種的擴大培養(yǎng)

將活化好的酵母菌轉接入裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，250mL錐形瓶中的裝液量為30～50mL，接種量為一環(huán)；在恒溫搖床里28℃恒溫振蕩培養(yǎng)48h，搖床轉速為170～200r/min。

3.菌種的保藏

（1）斜面保藏　將恢復生長活力的斜面菌種放入冰箱中進行低溫保藏。要求在30天左右進行傳代復活培養(yǎng)。

（2）甘油保藏　用無菌移液器取2mL生長良好的發(fā)酵液，于超凈工作臺上轉入無菌離心管中，然后加入1mL無菌甘油，蓋緊頂蓋后于振動器上將甘油和發(fā)酵液混合均勻。迅速置于-70℃冷凍保藏